基因擴(kuò)增儀的標(biāo)準(zhǔn)使用步驟分享
更新時(shí)間：2025-08-25 點(diǎn)擊次數(shù)：2619次
基因擴(kuò)增儀是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的核心設(shè)備，其運(yùn)行的準(zhǔn)確性直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。為確保DNA擴(kuò)增高效、特異且可重復(fù)，遵循規(guī)范的操作流程至關(guān)重要。以下是使用
基因擴(kuò)增儀的標(biāo)準(zhǔn)步驟，助您安全、高效完成每一次實(shí)驗(yàn)。
1、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備與環(huán)境檢查
在超凈臺(tái)或?qū)Ｓ肞CR準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行試劑配制，避免外源DNA污染。穿戴手套、口罩和實(shí)驗(yàn)服，使用無(wú)DNA酶的耗材（如PCR管、槍頭）。檢查擴(kuò)增儀電源連接是否正常，確認(rèn)熱蓋（HeatedLid）硅墊清潔無(wú)破損，加熱塊適配所用PCR管或板型（0.2mL單管、8聯(lián)管或96孔板）。
2、配制PCR反應(yīng)體系
根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，精確配制反應(yīng)混合液（MasterMix），包括模板DNA、引物、dNTPs、Taq酶、緩沖液等。建議在冰上操作，防止酶提前激活。將混合液分裝至PCR管或板中，蓋緊管蓋，避免氣泡產(chǎn)生。
3、裝載樣品并關(guān)閉熱蓋
將PCR管或板整齊放入儀器加熱塊中，確保每個(gè)樣品與模塊充分接觸。輕柔關(guān)閉熱蓋，使其壓緊PCR管蓋，防止高溫循環(huán)中管蓋爆開(kāi)或液體蒸發(fā)。若使用無(wú)熱蓋機(jī)型，需在每管中加入礦物油覆蓋。
4、程序設(shè)置與啟動(dòng)
打開(kāi)控制面板或連接軟件，新建或調(diào)用預(yù)設(shè)程序。準(zhǔn)確設(shè)置三步循環(huán)參數(shù)：
變性：通常94–98°C，20–30秒
退火：根據(jù)引物Tm值設(shè)定，50–65°C，20–30秒
延伸：72°C，按1kb/min計(jì)算時(shí)間
設(shè)置循環(huán)數(shù)（通常30–40次），以及初始變性和最終延伸步驟。確認(rèn)無(wú)誤后啟動(dòng)程序，儀器將自動(dòng)開(kāi)始溫控循環(huán)。
5、運(yùn)行監(jiān)控與結(jié)束操作
運(yùn)行期間可通過(guò)屏幕觀察實(shí)時(shí)溫度曲線，確保各階段溫度準(zhǔn)確。程序結(jié)束后，儀器通常會(huì)自動(dòng)降溫至4–10°C保存樣品。此時(shí)方可打開(kāi)熱蓋，取出PCR產(chǎn)物，立即進(jìn)行后續(xù)分析（如電泳、測(cè)序）或–20°C保存。
